Поврзан имуносорбент (ELISA, ELISA). Суштината на принципот на методот и фази на истражување. Анализа на класи на антитела антитело, имунолошки комплекс.

Во врска со развојот на мобилната технологија, молекуларна биологија, генетика, физиката, хемијата и многу други високо-технолошки дисциплини во секојдневна практика на воведување на нови висока прецизност и високо-технолошки методи. Овие трендови влијаат и интердисциплинарна област на медицинско знаење, и сродните области на биолошки, биохемиски проблеми. широко распространет и воведувањето на широко распространета метода на клиничката лабораториска дијагностика, наречен ензимски имуно за последните десет години.

Општо земено на технологија на имунолошки и ензимски реакции радиолошки широко се користат во мобилни пишување, клеточни култури од различни ткива од почетокот на 80-тите години на XX век. Сепак, овие методи се многу време, не е единствена, не се стандардизирани, што исклучува нивната употреба во терапевтски и дијагностички цели во толкаво мнозинство. Овие методи се користат тесна, висока технологија и високо специјализирана лабораторија.

Меѓутоа, со напредокот на технологијата, Микротехнологија, производство на различни биополимер материјали направени можно да се произведе готови комплети на ELISA дијагностика, кои ќе можат да ги користат во лабораторијата на здравствените установи генералист. ELISA е широко се користи за дијагноза на различни инфекции (кламидија, сифилис, цитомегаловирус, токсоплазмоза, херпес, итн), и акутни и хронични и латентни форми кои се појавуваат без клинички simptomov.Takzhe овој метод се користи за контрола на хронична болести. Ајде да се обидеме да разбереме што е овој метод и кои принципи се базира?

Компоненти поврзан имуносорбент - имунолошкиот одговор и ензимска реакција

Ензимски имуно, како што сугерира името, се состои од две различни компоненти - имунолошки реакции и ензимски реакции. Имунолошкиот одговор произведува обврзувачки биолошки молекули, клетки или микроорганизми клетки, кои, всушност, се обидуваат да се најде, и реакцијата на ензимски ни овозможува да се види и да се измери резултат на имунолошка реакција. Тоа е, на имунолошкиот одговор - е дел од еден комплексен техника, која, всушност, го открива саканиот микроб. А ензимска реакција - тоа е дел од еден комплексен техника, која ви овозможува да се преведе како резултат на имунолошкиот одговор во форма на око видливи и достапни за мерење рутински хемиски техники. Врз основа на таков метод структура имуно, ги анализираме двете страни одделно.

Имунолошкиот одговор дека е тоа? Што е антитело, антиген?

Што е имун одговор? Што е антиген?
Прво се анализира она што имунолошкиот одговор. имунолошки реакции - А со специфично врзување за реакција на антиген со антитело за да се формира имун комплекс. Што значи тоа? На површината на секоја клетка на секој организам постојат посебни структури наречени антигени. Антигени во целина - се молекули кои носат информации за мобилен (како информации за беџ со луѓе, кој ги одредува основните податоци на лице).

Индивидуални и специфични антигени - што е тоа? Зошто ни се потребни овие антигени?

постојат индивидуални антигени, која е уникатна за овој организам. Овие индивидуални антигени се разликува од сите луѓе, не постои слични едни на други, но сепак различни. Два идентични примероци на индивидуални антигени не постои!

На втората главна видот на антиген - е антигени видови, кои се својствени за секој посебен видови на живи суштества. На пример, едно лице е присутна специфичен антиген кој е заеднички за сите луѓе, кај глувците постои глувчешки видови антиген, итн На површината на секоја клетка се задолжително присутни на видовите и на поединецот антиген.

На специфичен антиген се користи имунолошкиот систем клетки за препознавање. "- друг"

Како е препознавање на антигенот?

Имунолошки клетки поврзани со сомнителни клетки и го носи идентификација е на поединецот антиген. "Напишано" клетки на имунолошкиот меморија изгледа како "својата антиген." Така, ако на антиген сомнителни клетки одговара на описот "својата антиген", тоа значи дека во ќелијата на сопственото тело и не е ништо сериозно. Тогаш имунолошките клетки "одврза" и си замина. И ако антигенот не е иста како и описот на "а", додека на имунолошките клетки идентификува ќелијата како "странски" и затоа потенцијално опасни за целиот организам. Во овој случај, на имунолошките клетки не е "одврза" и почнува да се уништи опасни објект. Точноста на таквите имунолошки признавање е неверојатен - 99,97%. практично нема грешки!

Што е антитело имун комплекс?
Што е антитело?

Антитела - посебен молекула се наоѓа на површината на имуните клетки. Тоа антитело се врзува за антигенот и сомнителни клетки. Понатаму трансфери антитела информации во ќелија, каде што признавањето, и добива повратен сигнал на два вида на "а" или "противник". Кога сигналот "a" го нарушува антитела комуникација со антигенот и изданија на клетката.

Што е имун комплекс?
Кога сигнал "странски" ситуација се развива различно. Антителото не се прекине врската со антиген, и обратно, со испраќање на одредени сигнали, предизвикува "засилување". Биолошки тоа значи дека другите антитела во друг дел од клетките почнуваат да се движат во област каде што постои опасност сигнал, а исто така и да формираат врска помеѓу антиген и фатен. На крајот, антигенот е опкружен од сите страни и цврсто privyazan.Takoy антиген + антитела наречени имун комплекс. Од тој момент, за отстранување на антигенот. Но, сега на деталите на процесот за неутрализирање на антиген ние не сме заинтересирани.

Видови на антитела (IgA, IgM, IgG, IgD, ИгЕ)
Антителата - протеин структура, кои соодветно да има име на хемикалијата, кој се користи како синоним за изразување антитело. Така, антитела се имуноглобулини =.

Постојат пет видови на имуноглобулини (Ig), кои се врзуваат за различни типови на антигени во различни места на човечкото тело (на пример, кожата, мукозните, крв, и така натаму. d.). Што е, на антитела имаат поделба на трудот. Овие се наречени имуноглобулини латиница - A, M, Г, Д, Е и се означени како што следува - IgA, IgM, IgG, ИгД, IgE.

Во дијагноза користејќи само еден тип на антитела што е најспецифично за дефинирани микроб. Тоа е, на врзување на антитела се дефинирани со антигенот секогаш се случува. Најчесто се користи IgG и IgM.

Овој принцип имунолошкиот одговор (единствена специфичност и точноста на признавање утврдени со биолошки објект), е основа имуносорбентна сила analiza.V висока прецизност антитела признавање антигени, точноста на сите имуно тест метод е исто така се чувствувате.

На ензимска реакција

Што реакција - ензим? Што е подлогата афинитет и производот?
Ние сега сметаат дека реакцијата на ензимски во методот на ензимски имуно.

Што е ензимска реакција?

На ензимска реакција - хемиска реакција во која една супстанција се конвертира од страна на ензимот на друг. Супстанца која делува на ензимот наречен супстрат. Супстанца која се добива од страна на влијанието на ензимот наречен производ на реакцијата од. Назначена со тоа, карактеристика на ензимската реакција е дека одреден ензим дејствува само на одредена подлога. Овој имот на ензимот да го признае "нивните" супстрат наречен афинитет.

Така, секој ензим носи само еден конкретен одговор на тоа. Ензимите во биолошкиот свет ја знае голем избор, како и ензимски реакции. На ELISA дијагностички користи само неколку ензимски реакции - не повеќе од 10. Кога овој избрани како enzymic производ реакција која е обоена супстанции. Зошто е реакцијата на ензимски производи мора да бидат обоени? Бидејќи не постои едноставна хемиски метод за пресметување на концентрацијата на супстанцијата на боја решение - колориметрија.

метод колориметрија - суштината и на принципот на

колориметрија користи за мерење на боја густина на растворот и по боја густина пресметува концентрацијата на veschestva.Pri овој посебен уред - colorimeter мерки бојата на густината на растворот. Во колориметрија две можни густина на бојата во зависност од концентрацијата на супстанцијата - е директно пропорционална зависност или обратно пропорционална. Во директен сооднос, повисока концентрација на супстанцијата, поинтензивна боја густина на растворот. Во обратна пропорција, толку поголема концентрација на супстанција, на намалување на бојата на густина на растворот. Технички, ова се одвива на следниот начин: презеде неколку решенија со позната концентрација на супстанцијата мери густината на овие решенија, концентрацијата се прикажува на густината на бојата (графикон за калибрација).

Следно, мерење на густината на бојата на растворот, концентрацијата на која се чини, калибрација и графикон се вредност концентрација одговара на нивото на измерената густина на бојата rastvora.V модерни автоматски colorimeters еднаш калибрација се врши, тогаш самата единица конструира калибрациона крива, која останува во меморијата, и мерење автоматски.

пероксидаза: На имуно тест најчесто се користат следниве ензими алкална фосфатаза, авидин.

Како комбиниран имунолошки и ензимска реакција во ELISA? Ние сега ќе продолжи да ги разгледува ензимски имуно. Кои се фазите тоа вклучува и она што се случува кога овие реакции? Поврзан имуносорбент е директни и индиректни.

Директен-поврзан имуносорбент - фази на

Во директна ELISA употреба на антитела за да се идентификува антиген во комбинација со специфични етикета. Оваа особено етикета е супстрат на реакцијата на ензимска.

Закачување на антигенот на површински антиген и соединението на бунари со антитело

Како директен ензимски имуно тест? Земете биолошки материјал (крв, слуз струготини, дамки) и сместени во специјални бунари. Биолошки материјал се оставени во бунари за 15-30 минути за да антигени може да се држи до површината на бунари. Понатаму, во овие бунари се додава антитела за откривање на антиген. Ова значи дека идентификувањето на антигени, како што се сифилис, додаде антитела против сифилис антигени. Овие антитела се произведени од страна на индустриски методи, и лабораториски купат готови nabory.Dannuyu мешавина на материјалот и антитела остави за некое време (од 30 минути до 4-5 часа), со антителата кои беа во можност да се најде и да стапат во контакт со "своите" antigenom.Chem повеќе во биолошки антигени примерок, повеќе контакт антитело со нив.

Отстранување на "непотребни" антитела

Како што споменавме, се додаваат антитела, исто така, се однесуваат на специфични metkoy.Poskolku антитела во вишок, не сите од нив ќе бидат во контакт со антигени, и ако не постојат антиген во примерокот, а потоа, според тоа, ниту на антитела не контактирате со саканата антиген. За отстранување на "екстра" антитела, содржината на бунари само истури. Како резултат на тоа, сите "вишокот" антитела се отстранети, а се оние кои се поврзани со антигени како антигени "залепени" на површината на бунари. Бунарите се исплакнат неколку пати со посебен решение, кој ви овозможува да се мијат сите "екстра" антитела.

На ензимска реакција - формирање на обоени Соединение

Потоа започнува втората фаза - ензимски реакции. Измиениот бунари беа додадени на ензимскиот раствор и се остава да отстои 30-60 минути. Овој ензим има афинитет на супстанција (специфичен ознака), кој е поврзан со антитело. реакции ензим се врши, како резултат на што овој конкретен етикета (супстрат) се конвертира во обоена супстанција (производ). Потоа метод колориметрија се дека концентрацијата на обоени супстанција. Од оваа специфична ознака се поврзани со антитела, а потоа на концентрација на производ на обоените реакција е еднаква на концентрација антитело. А концентрација на антитела еднаква на антиген концентрација. Така, како резултат на анализата, ќе го добиеме одговорот, што е концентрацијата на откриени микроб или хормон.

Тоа е она што поминува директно имуносорбентна анализа. Денес, меѓутоа, со поголема веројатност да се користи индиректна имуносорбент, со оглед на чувствителноста и точност на индиректни повисоки од директна. Значи, ајде да индиректна ензимски имуно.

Индиректно ензимски имуно - фази на

Во индиректна ЕЛИСА две фази. Во првата фаза се користат необележана антитела кон забележлива антигени, а во втората фаза се применува на првите означени антитело Неозначено антитела. Тоа не е добиен директно врзување на антитело со антиген, и двојно-проверка: врзување на антитела на антиген, при што врзувањето на вториот комплекс на антителото со антитело + антиген. Вообичаено, на антитело за првата фаза - глушец и за вториот - коза.

Фиксација на антигени на површината на бунари и врзување на антиген со необележана антитело
Исто како и за директниот ензимски имуно врши ограда биолошки материјал - крв ​​струготини, дамки. Истрага на биолошки материјал е додадена на бунари и се остава да отстои 15-30 минути за лепење на површински антигени на бунари. Тогаш бунари придонесе необележана антитела за антигени и е дозволено да време (1-5 часа) за да антителото контактиран со "нивните" антигени и имуниот комплекс формиран (првата фаза). Потоа отстранете на "вишокот", неврзани антитела со истурање на содржината на бунари. Плакне со посебен решение за целосно отстранување на сите не-врзани антитела.

Врзувањето на означени антитело на антиген, една Без етикета антитело +
Тогаш земи второ антитело - етикетирани, додадени на бунари и повторно да стои за некое време - 15-30 минути (реваншот). Во ова време, означени антитела се врзуваат за првиот - не се означени и да се формира комплекс - антитело + + антиген антитело. Сепак, етикетирани, и етикетирани антитела се воведени во бунари во вишок. Затоа е потребно уште еднаш да се отстрани "екстра", веќе означени антитела кои не се врзуваат на необележана антитела. Оваа постапка се повторува за истурање на содржината на бунари и миење со посебен решение.

На ензимска реакција - формирање на обоени Соединение
Потоа се воведе ензимот пее "тагови" реакцијата конверзија во обоена супстанција. Боја развива во рок од 5-30 минути. потоа се врши колориметрија и пресметување на концентрацијата на боја супстанција. Од концентрација на обоена супстанција е означен концентрација на антителото и концентрацијата на маркерот е еднаква на концентрација на необележана антитела, кој пак е еднаква на концентрацијата на антиген. Така, ние се добие концентрација на антиген забележливи.
Ваквата двојна контрола со помош на два вида на антитела зголемена на сензитивноста и специфичноста на ензимски имуносорбент. И покрај продолжување на времето на анализа и вклучување на дополнителни чекори, овие загуби се компензираат прецизност резултат. Тоа е причината зошто во моментот поголемиот дел од ензимот техники на имунолошка проба - ова е индиректен ензимски имуно.

Што болести се откриени од страна ензимски имуно дијагностика?

Ајде сега да се разгледа она што вид на болест и сите биолошки активни супстанции откриени од страна на ензимски имуно. Супстанции откриени од страна на ензимски имуно се прикажани во Табела.


Во табелата подолу не е комплетната листа на тестови (само најчестите), од страна на ELISA. Донесе целата листа не е можно, бидејќи тоа ќе биде многу голема и постојано се ажурираат. Во прилог на лабораториска дијагноза со ензимски имуно е широко се користат во научни истражувања.




Автор: AK Nasedkina